多重荧光RT-PCR技术检测毒鼠强中毒大鼠脑组织Bcl-2/Bax mRNA表达研究
董晓娜1，刘成昌1，朱传红2刘良3，刘艳3
1 周口市公安局刑侦支队，河南 周口466000
2 武汉市公安局刑事侦查局，湖北 武汉430024
3 华中科技大学同济医学院法医学系，湖北 武汉430030
【摘要】 目的 探讨TETS中毒后脑组织不同部位的bcl-2/bax mRNA表达及在TETS毒性机制中的作用。方法 选择健康Sprague-Dawley大白鼠30只，分成5组，每组6只，采用灌胃方法使大鼠毒鼠强染毒制作大鼠毒鼠强中毒模型，并以健康大鼠灌服生理盐水为对照，制作2.0LD50、1.0LD50、1/2LD50、1/10LD50大鼠急性、迁延性毒鼠强中毒模型，断颈处死大鼠，提取大鼠的脑皮质、脑干脑桥组织，用TRIzol提取不同中毒剂量大鼠的脑皮质和桥脑组织的总mRNA，建立多重复合荧光标记RT-PCR实验方法，观察中毒后不同中毒剂量大鼠脑皮质、桥脑bcl-2/bax mRNA表达的变化。结果 不同中毒剂量大鼠脑皮质、脑干bax mRNA均表达升高，bcl-2 mRNA均表达下降，且bcl-2/bax mRNA表达比值与正常组相比，有极显著性差异，P<0.01；不同中毒剂量同一部位bcl-2/bax mRNA表达比值，表现出明显的剂量—效应关系；比较同一中毒剂量组大鼠皮质与脑干bcl-2/bax mRNA表达比值差异，发现脑干部位bcl-2/bax mRNA表达比值比皮质小，且差异明显，P<0.05。采用峰高、峰面积代表PCR产物量，通过比较研究，发现差异无显著性。结论 TETS中毒大鼠脑组织bcl-2表达下降，bax表达升高，bcl-2/bax mRNA表达比值下降，推测凋亡也是TETS中毒机制的重要环节。
【关键词】 毒鼠强，中毒，多重PCR, RT-PCR, bax, bcl-2
拮抗γ-氨基丁酸（GABA）是毒鼠强毒性作用机制之一。同时研究发现，TETS的毒性作用还可诱导细胞DNA损伤及降低GABA受体的表达有关。程亦斌等利用小剂量TETS制作慢性中毒动物模型，发现TETS可诱导细胞凋亡，推测凋亡可能参入TETS毒作用机制。
为了进一步研究TETS诱导细胞凋亡的机制，本研究应用荧光标记技术、复合PCR技术、一步RT-PCR扩增法及毛细管电泳技术，研究不同中毒剂量大鼠的脑细胞的bcl-2/bax mRNA的表达差异，探讨凋亡因子与TETS毒性作用机制的关系。