3.4 培养基配制

每种培养基配方中有近20种化学药品，每种药品用量不大，常常需要使用分析天平。为简便起见，先按不同类别的药品混合或单独配成母液，贮存于冰箱备用。

3.4.1 母液（stock solution）配制

①大量元素：通常将所需元素按比例配成10倍（10×）浓度的溶液。

②微量元素：通常将所需元素按比例配成100倍（100×）浓度的溶液。

③铁盐：介绍一种螯合铁的配法。由5.75g FeSO4·7H2O和7.45g Na2-EDTA溶于1000mL水中，每升培养基中加铁盐5mL。

④有机附加物（包括维生素和生长调节物质）：分别配成mg/mL的母液，贮存于冰箱。注意：称量药品时，要注意药品所含结晶水与配方上所列的结晶水是否相同，如不相同需换算。配制母液时应依配方上先后次序将药品逐一溶解，一种药品完全溶解后再加入另一种药品，或各种药品单独溶解，然后依次相混，否则会产生不可逆沉淀，造成浪费。配制微量元素的母液时，因用量甚微无法称量，可放大千百倍，再经多级稀释的办法获得所需要的量。

3.4.2 培养基配制

培养基配方中化学药品和预先配制的母液种类繁多，数量各异，配制过程中极易遗漏或重复。为防止这种情况发生，宜事先根据培养基配方及需要配制的数量列出配料表并计算出每种溶液的需用量。以配制1.5 L B5培养基为例，每加完一种溶液划一记号（√）：

大量元素和微量元素的母液都是高浓度的。为防止两种高浓度母液混合在一起发生沉淀，建议加完大量元素后先加适量蒸馏水（约占所配培养基总体积的2/3～3/4左右），然后再加微量元素。

有时培养基经过高温灭菌，冷却后不凝固，可能的原因为：调pH时搅拌不够，pH太低；高温处理时间过长。

3.4.3 培养基灭菌

采用湿热灭菌法。瓶装溶液容积在1000mL以下者，在1.1kg/cm2,120℃下维持20min可达灭菌效果。超过20min，高温会使某些有机物（糖和维生素等）的分解增加，对培养不利。IAA、GA3等应使用微孔滤膜过滤除菌，并在培养基温度降低，但尚未凝固前加入其中，摇匀。

3.4.4 培养基存放

培养基应存放于背阴处。若含IAA、Kt则需放在暗处。刚配制的培养基凝固后表面会出现积水，最好过2～3天，当表面的积水被吸收后再接种。若急需接种则需用无菌吸管吸去表面流动的积水以免污染源随水流扩散。灭菌后的培养基应该在15天内用完，最多不得超过30天。

思考与讨论题

1．配制培养基的螯合铁母液时，称取5.75g FeSO4·7H2O和7.45g Na2-EDTA溶于1000mL水中。如果药柜中没有FeSO4·7H2O，只有FeSO4·12H2O，应该称取多少克FeSO4·12H2O？

2．在MS培养基中，CuSO4·5H2O的含量为0.025mg/L，现需要配制MS培养基微量元素的（100×）母液500mL，如何取用CuSO4·5H2O？

参考文献

[1] Salisbury, Ross．植物的矿质营养．∥北京大学生物系，华北农业大学农学系，等，译．植物生理学．北京：科学出版社，1979:148—155.

[2] Ensminger M E, Ensminger A H, Konlande J E, et al．维生素．∥王淮洲，王惟球，王模善，等，译．食物与营养百科全书选辑（4）．营养素．北京：农业出版社，1988:73—75.

[3] Dodds J H, Roberts L W. ∥ Experiments in plant tissue culture. Cambridge: Cambridge University Press, 1982:21—35.

[4] 桂耀林．常用药品的特点及其贮藏与配制．∥中国植物学会．植物组织培养法（内部资料）, 12—16.