工作任务
任务1 初代培养
子任务1-1 离体根的初代培养
一、工作目标
了解离体根培养的方法和步骤。熟练外植体的选择、消毒、接种等操作过程。完成离体根的初代培养过程、熟练无菌操作规程。
二、材料用具
超净工作台、高压灭菌锅、电磁炉、无菌打孔器、无菌培养皿、酒精灯、接种工具、刮皮刀、无菌瓶、烧杯（500mL）、无菌滤纸、玻璃棒、火柴、记号笔、纱布、70%乙醇、胡萝卜肉质根、母液、培养瓶、移液管、95%乙醇、饱和漂白粉、0.1%氯化汞、无菌水等。
三、工作过程
1．外植体选择与处理
取健壮的胡萝卜肉质根，用自来水冲净，用刮皮刀削去外层组织1～2mm厚，横切成10mm厚的切片，然后在超净工作台上将胡萝卜切片放入无菌瓶中，用70%乙醇处理几秒，无菌水冲洗一次，用饱和漂白粉溶液浸泡10min，无菌水漂洗3～4次，每次30～60s。将胡萝卜切片平放在无菌培养皿中，一只手用镊子固定胡萝卜片，另一只手用打孔器沿形成层区域垂直钻取圆柱体若干，然后用玻璃棒轻轻将圆柱体从打孔器中推出，放入装有无菌水的培养皿中。反复操作，直到达到接种数量要求。
2．接种
从培养皿中取出胡萝卜圆柱体，放在无菌培养皿中，用解剖刀切除圆柱体两端各2mm的组织，然后将余下部分分切成3片（每片约2mm厚，小圆片直径5mm），用无菌滤纸吸干圆片两面的水分，然后左手握住培养瓶，用火焰烧瓶口和封口材料，用右手的拇指和小指打开瓶盖，当打开瓶子时，瓶口朝向酒精灯火焰，并拿成斜角，以免灰尘落入瓶中造成污染。用镊子将胡萝卜片接种到培养基（为预先配制的诱导愈伤组织培养基，初代培养基配方为MS＋IAA 1.0mg/L＋KT 0.1mg/L）中，用酒精灯灼烧一下瓶口和瓶盖，然后盖严，进行培养。同时操作期间经常用70%乙醇擦拭双手和台面，并经常进行接种工具的灭菌，避免交叉污染。
3．培养
置于25℃恒温箱中暗培养。接种几天后，外植体表面开始变得粗糙，有许多光亮点出现（这是愈伤组织开始形成的表现），3～4周后形成大量愈伤组织。
4．观察记录
跟踪观察记录产生愈伤组织和不定芽的时间以及出愈率、分化率和污染率等技术指标，及时淘汰劣苗、污染苗。
四、注意事项
（1）外植体要求无病、健壮。
（2）用打孔器钻取胡萝卜根时必须打穿组织。
（3）严守无菌操作规程。
五、考核内容与评分标准
1．相关知识
（1）接种过程中的注意事项（20分）。
（2）常规灭菌方法（20分）。
2．操作技能
（1）熟练掌握外植体选择、灭菌技术（30分）。
（2）熟练掌握外植体接种技术（30分）。
子任务1-2 马铃薯茎尖初代培养
一、工作目标
了解茎尖初代培养的方法和步骤。熟练掌握外植体的取材、消毒、接种、初代培养的操作过程。掌握植物茎尖的初代培养方法。
二、材料用具
超净工作台、高压灭菌锅、电磁炉、解剖镜、解剖刀、解剖针、长镊子、培养皿、酒精灯、接种工具、无菌瓶、烧杯（500mL）、玻璃棒、火柴、记号笔、纱布、70%乙醇、75%乙醇母液、培养瓶、移液管、95%乙醇、0.1%氯化汞、马铃薯块茎等。
三、工作过程
1．培养基配制
初代培养基采用MS＋GA3 0.1mg/L＋NAA 0.5mg/L＋6-BA 0.5mg/L，在初代培养前配制相应的固体培养基，并进行灭菌，备用。
2．外植体选择与处理
马铃薯茎尖1～2cm，自来水冲洗30min，剥去外面的叶片。
3．外植体灭菌与接种
接种前，打开超净台紫外灯以及接种室紫外灯灭菌30min，30min后打开超净台鼓风，关闭紫外灯。在准备室用肥皂水清洗双手，穿好经灭菌的实验服并戴好口罩，进入接种室打开超净台的照明灯。用70%乙醇擦拭双手和超净工作台台面，并把灭菌的培养基用70%乙醇擦拭后放入超净工作台。
取出接种工具浸泡在盛有95%乙醇的罐头瓶内，成套培养皿放在超净台面上。然后点燃酒精灯，按培养皿、接种工具的先后顺序在火焰上分别灭菌，并将接种工具摆放在培养皿或器械架上。
然后将外植体材料放在超净工作台上进行消毒。先用75%的乙醇浸润15s，然后用无菌水冲洗3～5次，再用0.1%的升汞浸泡8～10min，浸泡时可进行摇动，使植物材料和灭菌剂有良好的接触，然后用无菌水漂洗3～5次。最后将处理过的材料放入灭过菌的培养皿中待用。在解剖镜下一手拿镊子，一手拿解剖刀，将已消毒的茎尖放在解剖镜下，逐层剥去幼叶直至露出圆锥形生长点，用灭过菌的解剖刀切取长约0.3～0.5mm带1～2个叶原基的茎尖，切面要平整。然后左手握住培养瓶，用火焰烧瓶口和封口材料，用右手的拇指和小指打开瓶盖，当打开培养瓶时，瓶口朝向酒精灯火焰，并拿成斜角，迅速地将茎尖接种到MS＋GA3 0.1mg/L＋NAA 0.5mg/L＋6-BA 0.5mg/L培养基中，盖上瓶盖。同时操作期间经常用70%乙醇擦拭双手和台面，接种工具要反复在95%的乙醇中浸泡和在火焰上灭菌，避免交叉污染。
4．初代培养
将接种后的材料放入培养室内培养，培养条件为温度23～27℃，光照1000～3000lx，16h/d。大约5～7d后茎尖转绿，40～50d成苗。当新梢长出2～3cm长的腋芽时，在无菌条件下将无菌瓶苗剪成一段一芽，进行继代培养。
5．观察记录
跟踪观察记录产生愈伤组织和不定芽的时间以及出愈率、分化率和污染率等技术指标，及时淘汰劣苗、污染苗。
四、注意事项
（1）外植体要求采用无病、健壮植株的茎段。
（2）腋芽萌发后及时转接到增殖培养基。
（3）严守无菌操作规程。
五、考核内容与评分标准
1．相关知识
（1）茎尖接种过程中的注意事项（20分）。
（2）茎尖灭菌方法（10分）。
（3）茎尖的剥离（20分）
2．操作技能
（1）熟练掌握外植体选择、灭菌技术（10分）。
（2）熟练掌握外植体接种技术（10分）。
（3）熟练掌握培养基的配制灭菌（10分）。
（4）熟练掌握茎尖初代组织培养（10分）。
（5）熟练掌握茎尖剥离的方法（10分）
子任务1-3 茎段初代培养
茎段初代培养
一、工作目标
了解茎段培养的方法和步骤。熟练掌握外植体的取材、消毒、接种、初代培养等操作过程。熟练茎段的初代培养程及无菌操作规程。
二、材料用具
超净工作台、高压灭菌锅、电磁炉、无菌培养皿、酒精灯、接种工具、无菌瓶、烧杯（500mL）、玻璃棒、火柴、记号笔、纱布、70%乙醇、75%乙醇、矮牵牛茎段、母液、培养瓶、移液管、95%乙醇、0.1%氯化汞。
三、工作过程
1．培养基配制
初代培养基采用MS＋6-BA 0.3～1.0mg/L；在初代培养前配制相应的固体培养基，并进行灭菌，备用。
2．外植体选择与处理
接种前，取生长健壮、无病虫害的矮牵牛植株，剪取茎段，带回实验室，用剪刀剪去叶片和叶柄，用自来水冲洗，剪成带节小段。
3．外植体灭菌与接种
接种前，打开超净台紫外灯以及接种室紫外灯灭菌30min，30min后打开超净台鼓风，关闭紫外灯。在准备室用肥皂水清洗双手，穿好经灭菌的实验服并戴好口罩，进入接种室打开超净台的照明灯。用70%乙醇擦拭双手和超净工作台台面，并把灭菌的培养基用70%乙醇擦拭后放入超净工作台。
取出接种工具浸泡在盛有95%乙醇的罐头瓶内，成套培养皿放在超净台面上。然后点燃酒精灯，按培养皿、接种工具的先后顺序在火焰上分别灭菌，并将接种工具摆放在培养皿或器械架上。
将剪好的矮牵牛小段装入烧杯中，在超净工作台上，用75%乙醇处理30s，0.1%氯化汞8～10min，浸泡时可进行摇动，使植物材料和灭菌剂有良好的接触，然后用无菌水漂洗 3～5次。取下镊子、剪刀在酒精灯火焰上灭菌，然后一手拿镊子，一手拿剪刀，将消毒好的茎段去除两端被消毒剂杀伤的部位，再剪成一段一芽的小茎段。然后左手握住培养瓶，用火焰烧瓶口和封口材料，用右手的拇指和小指打开瓶盖，当打开培养瓶时，瓶口朝向酒精灯火焰，并拿成斜角，以免灰尘落入瓶中造成污染。用镊子将茎段接种到MS＋6-BA 0.3～1.0mg/L培养基中，盖上瓶盖。同时操作期间经常用70%乙醇擦拭双手和台面，接种工具要反复在95%的乙醇中浸泡和在火焰上灭菌，避免交叉污染。
4．初代培养
接种后培养瓶置于22～24℃，光强1500～2000lx，光照时间12h/d的培养室内培养。 2～3周后，从叶腋处长出1cm左右长的腋芽，在无菌条件下将无菌瓶苗剪成一段一芽，进行继代培养。
5．观察记录
培养过程中跟踪观察，统计各项技术指标，及时分析并有效解决存在的问题，发现污染瓶及时清洗。
四、注意事项
（1）外植体要求采自无病、健壮植株。
（2）灭菌后接种前茎段两端要剪掉。
（3）严守无菌操作规程。
五、考核内容与评分标准
1. 相关知识
（1）茎段接种过程中的注意事项（20分）。
（2）茎段灭菌方法（10分）。
（3）茎段初代组织培养的一般过程（20分）。
2．操作技能
（1）熟练掌握外植体选择、灭菌技术（10分）。
（2）熟练掌握外植体接种技术（10分）。
（3）熟练掌握培养基的配制灭菌（10分）。
（4）熟练掌握茎段初代组织培养（20分）。
子任务1-4 离体叶的培养
一、工作目标
了解叶片培养的方法和步骤。熟练掌握外植体的取材、消毒、接种、初代培养等操作过程。
二、材料用具
超净工作台、高压灭菌锅、电磁炉、无菌培养皿、酒精灯、接种工具、无菌瓶、烧杯（500mL）、玻璃棒、火柴、记号笔、纱布、70%乙醇、75%乙醇、驱蚊草的叶片、母液、培养瓶、移液管、95%乙醇、0.1%氯化汞、无菌水等。
三、工作过程
1．培养基配制
初代培养基采用MS＋6-BA 0.3～1.0mg/L；在初代培养前配制相应的固体培养基，并进行灭菌，备用。
2．外植体选择与处理
接种前，取生长健壮、无病虫害的驱蚊草植株，剪取叶片，带回实验室，用自来水冲洗。
3．外植体灭菌与接种
接种前，打开超净台紫外灯以及接种室紫外灯30min，30min后打开超净台鼓风，关闭紫外灯。在准备室用肥皂水清洗双手，穿好经灭菌的实验服并戴好口罩，进入接种室打开超净台的照明灯。用70%乙醇擦拭双手和超净工作台台面，并把灭菌的培养基用70%乙醇擦拭后放入超净工作台。
取出接种工具浸泡在盛有95%乙醇的罐头瓶内，成套培养皿放在超净台面上。然后点燃酒精灯，按培养皿、接种工具的先后顺序在火焰上分别灭菌，并将接种工具摆放在培养皿或器械架上。
将处理好的驱蚊草的叶片装入烧杯中，在超净工作台上，用75%乙醇处理30s，0.1%氯化汞5～6min，加入1～2滴吐温-80，浸泡时可进行摇动，使植物材料和灭菌剂有良好的接触，然后用无菌水漂洗3～5次。取下镊子、剪刀在火焰上灭菌，然后一手拿镊子、一手拿剪刀，用剪刀剪去叶缘和叶尖后，将叶片剪成0.5cm见方的小叶块，然后左手握住培养瓶，用火焰烧瓶口和封口材料，用右手的拇指和小指打开瓶盖，当打开培养瓶时，瓶口朝向酒精灯火焰，并拿成斜角，以免灰尘落入瓶中造成污染。用镊子将消毒好的小叶块接种到MS＋6-BA 0.3～1.0mg/L培养基中，一般要求叶背面朝上平放培养基上，盖上瓶盖。同时操作期间经常用70%乙醇擦拭双手和台面，接种工具要反复在95%的乙醇中浸泡和在火焰上灭菌，避免交叉污染。
4．初代培养
接种后培养瓶置于25℃、光强1000～1500lx、光照16h/d的培养室内培养。4周后陆续有不定芽产生。
5．观察记录
跟踪观察记录产生愈伤组织和不定芽的时间以及出愈率、分化率和污染率等技术指标，及时淘汰劣苗、污染苗。
四、注意事项
（1）注意叶片的分切部位与分切方法。
（2）根据叶片的幼嫩程度合理选择消毒剂和确定适宜的灭菌时间，防止消毒过度。
（3）接种时，接种工具灼烧灭菌后要充分冷凉后再接种，防止造成叶片、叶柄烫伤。
（4）注意把握愈伤组织分化时机。
五、考核内容与评分标准
1．相关知识
（1）叶片接种过程中的注意事项（20分）。
（2）叶片灭菌方法（30分）。
2．操作技能
（1）熟练掌握外植体选择、灭菌技术（10分）。
（2）熟练掌握外植体接种技术（20分）。
（3）熟练掌握培养基的配制灭菌（10分）。
（4）熟练掌握叶片组织培养（10分）。
子任务1-5 胚初代培养
一、工作目标
了解胚培养的方法和步骤。熟练掌握外植体的取材、消毒、接种、初代培养等操作过程。熟练掌握胚的初代培养过程。
二、材料用具
超净工作台、高压灭菌锅、电磁炉、无菌培养皿、酒精灯、接种工具、无菌瓶、烧杯（500mL）、玻璃棒、火柴、记号笔、纱布、70%乙醇、75%乙醇、苹果种子、12%～14%次氯酸钠溶液、母液、培养瓶、移液管、95%乙醇、无菌水等。
三、工作过程
1．培养基配制
初代培养基为MS＋6-BA 0.5～1.0mg/L＋IAA 0.05～0.2mg/L；在初代培养前配制相应的固体培养基，并进行灭菌，备用。
2．外植体选择与处理
将经层积处理的成熟饱满的苹果种子在蒸馏水中浸泡12h。
3．外植体灭菌与接种
接种前，打开超净台紫外灯以及接种室紫外灯灭菌30min，30min后打开超净台鼓风，关闭紫外灯。在准备室用肥皂水清洗双手，穿好经灭菌的实验服并戴好口罩，进入接种室打开超净台的照明灯。用70%乙醇擦拭双手和超净工作台台面，并把灭菌的培养基用70%乙醇擦拭后放入超净工作台。
取出接种工具浸泡在盛有95%乙醇的罐头瓶内，成套培养皿放在超净台面上。然后点燃酒精灯，按培养皿、接种工具的先后顺序在火焰上分别灭菌，并将接种工具摆放在培养皿或器械架上。然后将外植体材料在超净工作台上用75%的乙醇浸泡10s，再用12%～14%的次氯酸钠消毒15min，最后用无菌水冲洗3次。浸泡时可进行摇动，使植物材料和灭菌剂有良好的接触。将1粒种子置于无菌培养皿中，用镊子夹住，用解剖刀先将种皮划破，再用另一把镊子轻轻把种皮剥去，然后用解剖刀沿胚胎的边缘小心地剥去胚乳。分离出胚后，用无菌水将每1个胚冲洗3次，然后左手握住培养瓶，用火焰烧瓶口和封口材料，用右手的拇指和小指打开瓶盖，当打开培养瓶时，瓶口朝向酒精灯火焰，并拿成斜角，以免灰尘落入瓶中造成污染。用镊子将消毒好的胚接种到MS培养基中，盖上瓶盖。同时操作期间经常用70%乙醇擦拭双手和台面，接种工具要反复在95%的乙醇中浸泡和在火焰上灭菌，避免交叉污染。
4．初代培养
将培养瓶置于黑暗中培养，保持温度25℃，3～4d后转入光下培养，观察其生长状况。
5．观察记录
跟踪观察记录产生愈伤组织和不定芽的时间，以及出愈率、分化率和污染率等技术指标，及时淘汰劣苗、污染苗。
四、注意事项
（1）剥离胚时一定要细心谨慎，尽量使胚完整无损伤。
（2）注意观察胚的位置和成熟度。
五、考核内容与评分标准
1．相关知识
（1）胚剥离过程中的注意事项（20分）。
（2）外植体灭菌方法（10分）。
（3）胚组织初代培养的一般过程（20分）
2．操作技能
（1）熟练掌握外植体选择、灭菌技术（10分）。
（2）熟练掌握外植体接种技术（10分）。
（3）熟练掌握培养基的配制灭菌（20分）。
（4）熟练掌握胚组织培养（10分）。
子任务1-6 花药初代培养
一、工作目标
了解花药培养的方法和步骤。熟练掌握外植体的取材、消毒、接种、初代培养等操作过程。掌握花药的初代培养过程、熟练无菌操作规程。
二、材料用具
超净工作台、高压灭菌锅、电磁炉、无菌培养皿、酒精灯、接种工具、无菌瓶、烧杯（500mL）、玻璃棒、火柴、记号笔、纱布、70%乙醇、75%乙醇、大花萱草花蕾、0.1%升汞、5%次氯酸钠、母液、培养瓶、移液管、95%乙醇、无菌水等。
三、工作过程
1．培养基配制
初代培养基：MS＋NAA 5.0mg/L＋KT 0.5mg/L；在初代培养前配制相应的固体培养基，并进行灭菌，备用。
2．外植体选择与处理
开花前3～5d，从生长正常、无病虫害的大花萱草植株上剪下带花梗的花蕾，流水冲洗0.5～1h后备用。
3．外植体灭菌与接种
接种前，打开超净台紫外灯以及接种室紫外灯灭菌30min，30min后打开超净台鼓风，关闭紫外灯。在准备室用肥皂水清洗双手，穿好经灭菌的实验服并戴好口罩，进入接种室打开超净台的照明灯。用70%乙醇擦拭双手和超净工作台台面，并把灭菌的培养基用70%乙醇擦拭后放入超净工作台。取出接种工具浸泡在盛有95%乙醇的罐头瓶内，成套培养皿放在超净台面上。然后点燃酒精灯，按培养皿、接种工具的先后顺序在火焰上分别灭菌，并将接种工具摆放在培养皿或器械架上。然后在超净工作台上进行花蕾表面消毒。具体方法是：先用75%的乙醇浸泡30s，再用0.1%升汞浸泡6min，最后用无菌水冲洗3～5次，用无菌滤纸吸干水分。浸泡时可进行摇动，使植物材料和灭菌剂有良好的接触。用接种工具去除花梗，剥掉花被，最后取出花药，接种于MS＋NAA 5.0mg/L＋KT 0.5mg/L初代培养基上。同时操作期间经常用70%乙醇擦拭双手和台面，接种工具要反复在95%的乙醇中浸泡和在火焰上灭菌，避免交叉污染。
4．初代培养
接种后置于25℃、光照10～12h/d、光强1500～2000lx的条件下培养。
5．观察记录
跟踪观察记录产生愈伤组织和不定芽的时间以及出愈率、分化率和污染率等技术指标，及时淘汰劣苗、污染苗。
四、注意事项
（1）用镊子夹取花药时力度要小，子房要竖直插入培养基。
（2）注意花蕾的采集时间。
五、考核内容与评分标准
1．相关知识
（1）花药剥离过程中的注意事项（20分）。
（2）外植体灭菌方法（10分）。
（3）花药组织初代培养的一般过程（20分）。
2．操作技能
（1）熟练掌握外植体选择、灭菌技术（10分）。
（2）熟练掌握外植体接种技术（10分）。
（3）熟练培养基的配制灭菌（20分）。
（4）熟练掌握花药初代组织培养（10分）。
任务2 继代培养
子任务2-1 愈伤组织继代培养
一、工作目标
了解愈伤组织继代培养的方法和步骤。熟练掌握继代培养的操作过程。
二、材料用具
超净工作台、高压灭菌锅、电磁炉、解剖刀、长镊子、培养皿、酒精灯、接种工具、烧杯（500mL）、玻璃棒、火柴、记号笔、纱布、70%乙醇、培养瓶、移液管、花药愈伤组织等。
三、工作过程
1．培养基配制
继代培养基采用N6＋2，4-D 2.0mg/L，在继代培养前配制相应的固体培养基，并进行灭菌，备用。
2．接种
接种前，打开超净台紫外灯以及接种室紫外灯灭菌30min，30min后打开超净台鼓风，关闭紫外灯。在准备室用肥皂水清洗双手，穿好经灭菌的实验服并戴好口罩，进入接种室打开超净台的照明灯。用70%乙醇擦拭双手和超净工作台台面，并把灭菌的培养基用70%乙醇擦拭后放入超净工作台。
取出接种工具浸泡在盛有95%乙醇的罐头瓶内，成套培养皿放在超净台面上。然后点燃酒精灯，按培养皿、接种工具的先后顺序在火焰上分别灭菌，并将接种工具摆放在培养皿或器械架上。
无菌条件下，左手握住愈伤组织培养瓶和接种瓶，用火焰烧瓶口和封口材料，打开无菌瓶苗瓶盖，瓶口朝向酒精灯火焰，并拿成斜角，用解剖刀将愈伤组织切成小块，然后打开接种瓶瓶盖，用镊子将愈伤组织接种到N6＋2，4-D 2.0mg/L继代培养基中，盖好盖进行培养。
3．观察记录
跟踪观察记录产生愈伤组织和不定芽的时间以及出愈率、分化率和污染率等技术指标，及时淘汰劣苗、污染苗。
四、注意事项
（1）无菌操作规程。
（2）培养基灭菌。
（3）严守无菌操作规程。
五、考核内容与评分标准
1．相关知识
（1）愈伤组织接种过程中的注意事项（30分）。
（2）愈伤组织继代方法（20分）。
2．操作技能
（1）熟练掌握愈伤组织接种（30分）。
（2）熟练掌握愈伤组织切割（10分）。
（3）熟练培养基的配制灭菌（10分）。
子任务2-2 瓶苗继代培养
茎段继代培养
一、工作目标
了解瓶苗继代培养的方法和步骤。熟练掌握瓶苗继代培养的操作过程。
二、材料用具
超净工作台、高压灭菌锅、电磁炉、解剖刀、长镊子、培养皿、酒精灯、接种工具、烧杯（500mL）、玻璃棒、火柴、记号笔、纱布、70%乙醇、培养瓶、移液管、瓶苗等。
三、工作过程
1．培养基配制
继代培养基采用MS＋IAA 1.5mg/L，在继代培养前配制相应的固体培养基，并进行灭菌，备用。
2．接种
接种前，打开超净台紫外灯以及接种室紫外灯灭菌30min，30min后打开超净台鼓风，关闭紫外灯。在准备室用肥皂水清洗双手，穿好经灭菌的实验服并戴好口罩，进入接种室打开超净台的照明灯。用70%乙醇擦拭双手和超净工作台台面，并把灭菌的培养基用70%乙醇擦拭后放入超净工作台。
取出接种工具浸泡在盛有95%乙醇的罐头瓶内，成套培养皿放在超净台面上。然后点燃酒精灯，按培养皿、接种工具的先后顺序在火焰上分别灭菌，并将接种工具摆放在培养皿或器械架上。
无菌条件下，左手握住无菌瓶苗的培养瓶和接种瓶，用火焰烧瓶口和封口材料，打开无菌瓶苗瓶盖，瓶口朝向酒精灯火焰，并拿成斜角，将瓶苗茎剪成一段一芽的小茎段，然后打开接种瓶瓶盖，用镊子将小茎段接种到MS＋IAA 1.5mg/L继代培养基中，盖好盖进行培养。侧芽继续伸长并萌发出新的侧枝，4～5周后继续分切成单芽茎段进行增殖培养。
3．观察记录
跟踪观察记录产生愈伤组织和不定芽的时间以及出愈率、分化率和污染率等技术指标，及时淘汰劣苗、污染苗。
四、注意事项
（1）无菌操作规程。
（2）培养基灭菌。
（3）严守无菌操作规程。
五、考核内容与评分标准
1．相关知识
（1）瓶苗接种过程中的注意事项（30分）。
（2）瓶苗继代方法（20分）。
2．操作技能
（1）熟练掌握瓶苗的接种（30分）。
（2）熟练掌握瓶苗的切割（10分）。
（3）熟练培养基的配制灭菌（10分）。
任务3 生根培养
生根培养
一、工作目标
熟练掌握生根培养的各个技术环节，包括生根培养基的配制、生根试管的接种、培养观察等。熟练掌握生根培养全过程。
二、材料用具
组培苗、超净台、剪刀、解剖刀、镊子、培养皿、灭菌锅、电磁炉、烧杯、培养瓶、移液管、酒精灯、无菌滤纸、75%乙醇、95%乙醇、蒸馏水、MS基本培养基各种母液、蔗糖、琼脂、NAA激素母液等。
三、工作过程
1．生根培养基的配制
（1）吸取MS母液：按母液顺序和规定量，用移液管提取母液，放入盛有一定量蒸馏水的烧杯。MS培养基无机盐浓度较高，不适宜生根，所以一般在配制生根培养基时需要将大量元素母液减半，配制成1/2MS培养基。
（2）加入生长调节物质：生长素利于根的生长，所以一般在配制生根培养基时加入生长素。NAA即是一种比较适合的生长调节物质。
（3）加入蔗糖：30g/L。
（4）定容：按照配制的量，加蒸馏水定容后倒入锅中。
（5）调节pH值：用0.1mol/L的NaOH或0.1mol/L的HCl调节pH值。
（6）熔化琼脂：7g/L（视琼脂质量而定），在电炉上加热溶液，并不断搅拌，使琼脂熔化。
（7）分装与封口：待琼脂溶解后，马上进行分装与封口，防止凝固。
（8）培养基的灭菌：打开灭菌锅锅盖，加水至水位线。把已装好培养基的三角瓶，连同蒸馏水及接种用具等放入锅筒内，装时不要过分倾斜培养基，以免弄到瓶口上或流出。然后盖上锅盖，对角旋紧螺丝，接通电源加热，当升至0.05MPa时，打开放气阀放气，回“0”后关闭放气阀。当气压上升到0.10MPa时，保压灭菌20min，到时停止加热。当气压回“0”后打开锅盖，取出培养基和灭菌用品，放于平台上冷凝。
2．接种
（1）进入实验室后用水和肥皂洗净双手，穿戴上灭过菌的专用实验服、帽子、鞋子。
（2）打开超净工作台紫外灯，并打开无菌操作室内的紫外灯，照射20～30min（进行紫外灭菌）。
（3）照射20～30min后打开鼓风，关闭紫外灯，打开超净工作台照明灯，鼓风吹10～20min，用75%的乙醇擦拭工作台和双手，准备进行接种工作。
（4）用蘸有75%乙醇的纱布擦拭装有培养基的培养瓶，放进工作台。
（5）把接种器械浸泡在95%乙醇中，在酒精灯火焰上灭菌后，放在器械架上。
（6）用镊子将诱导出的不定芽剥离或将组培苗取出放于培养皿内，一手用镊子固定、一手用解剖刀将不定芽切下。用镊子把不定芽接种到生根培养基中。注意接种时使培养基成一定的倾斜度，将不定芽的基部插入培养基的内部。每瓶接种约3个小植株。
（7）整理实验用品。
3．培养并观察
（1）培养：将接种完成的试管苗置于培养室，培养约20d。
（2）观察记录：一般12～15d后，小植株的基部即可看到有白色的根原基出现，慢慢即可变成正常的根，25d左右根长至1～3cm，当大部分根长至1～3cm时，打开瓶口，炼苗2～3d后，即可将小苗移栽到土壤中。
四、注意事项
（1）在配制培养基时，琼脂的量称量要准确，防止培养基不凝固。
（2）在配制培养基时，pH值要调节准确，防止培养基不凝固，或者影响培养基营养成分。
（3）接种时一定要按照无菌规范操作，减少试管苗污染。
五、考核内容与评分标准
1．相关知识
（1）记录试管苗生根培养步骤，统计生根率（10分）。
（2）生根培养基为何使用1/2 MS培养基（10分）。
（3）具体说明接种过程中的注意事项（20分）。
2．操作技能
（1）固体培养基的配制（20分）。
（2）无菌接种（20分）。
（3）试管苗的培养与观察（20分）。
素质拓展