4.3　仪器结构与原理

常用的荧光测定仪器有荧光分光光度计，一般由光源、单色仪、样品池、检测器及数据记录系统组成。仪器的基本构造如图4-4所示。

图4-4　荧光分光光度计结构框图

由光源发出的光经过单色仪后得到所需要的激发光波长，入射到样品池上激发荧光物质产生荧光，为消除入射光及散射光的影响，荧光的测量方向通常与激发光成90°角。荧光通过第二个单色仪分光后进入检测器而被检测。第二个单色仪的作用是消除溶液中可能存在的其他波长的光的干扰。

（1）光源　高压氙灯是目前荧光分光光度计中应用最为广泛的一种光源，在400～800nm波长范围内提供连续的光。此外，发光二极管或者激光二极管也可作为光源，这类光源轻便、所需能量较少，产生的热量很少。发光二极管属于连续光源但限于小范围光谱区的输出，而激光二极管则属于单色光源。激光是一种能量集中、具有良好单色性的光源，使用激光源能够极大地提高荧光检测的灵敏度。利用激光作为光源的激光诱导荧光检测技术已经实现了单分子检测的目标，从而使荧光分析具有更为广阔的应用。

（2）单色仪　单色仪的作用是对波长进行选择，包括激发波长和发射波长。常用的单色仪有光栅和滤光片。

（3）样品池　荧光检测的样品池通常采用四面透光的方形石英池。

（4）检测器　现代荧光分光光度计普遍采用光电倍增管（PMT）作为检测器。电荷耦合器件（charge-coupled device，CCD）是一种多通道检测器，具有连续采集多维图谱的功能。CCD作为检测器已在荧光显微镜上得到广泛应用。

（5）数据记录系统　目前商品化的荧光分光光度计都由计算机控制，并配有相应的软件。