临床实验室要求配套试剂系统评估那些标本完整性相关的常规干扰，比如溶血、黄疸和乳糜(HIL)。通常实验室工作人员是肉眼观测标本的质量，但是肉眼观测并不能准确地发现可能存在的干扰物质或干扰物质的结合物。

资源和预算的限制使得临床实验室要依赖厂商在产品标签中说明的HIL估算值和干扰物。因此，临床实验室人员有责任要验证厂商说明书中阐述的估算值的目标用途、优势以及局限性。例如，厂商进行的干扰物研究对于某些分析物(比如，肌钙蛋白Ⅰ)而言可能并不在其恰当的临床决定水平上。此外，实验室需要给出非最优标本的处理程序以及给出警示临床人员有责任进行患者护理的制度。

自动化的HIL监测系统能为标本质量评估给出一种客观一致的方法学。血清指数是通过测吸光度计算出的，这样半定量得出HIL的估算值。

装有自动检测HIL系统的临床化学分析仪能给出估算患者标本中HIL浓度的指数。检测干扰物的自动化过程为实验室估算溶血、黄疸和乳糜造成的干扰程度提供了一套标准化的工具。

能检测出标本中主要干扰物指数的自动化系统具有巨大的价值。这种价值可以用于帮助判断检测结果报告是否可以发出，或者当标本的干扰物超出了制造商或实验室给出的“临界值”，是否应该拒收标本。实验室应该基于标本的周转时间(TAT)、标本量和分析物来判断是否要测量HIL指数。如果分析物易受到HIL的干扰，应该对所有的标本进行HIL指数的检测。

血清指数的设定是由自动化系统的方法性能确定的。纵观目前自动化HIL系统，HIL指数的最高等级的设定是相似的，而中级的设定在不同系统之间有着相当大的差异。

制造商在设定HIL指数时，应该考虑到如下几点:

1)作为血红蛋白、黄疸和乳糜干扰物的材料;

2)干扰物的浓度水平:血红蛋白、胆红素和乳糜的最大浓度应该与HIL的最大指数一致。血红蛋白的浓度不低于500mg/dl，胆红素的浓度不低于30mg/dl，甘油三酯的浓度不低于1000mg/dl。关于自动化HIL系统干扰物及最大浓度情况见表5-10;

3)标本的体积应该适用于各种类型的患者人群，包括小标本的体积(如新生儿、老年人);

4)标本的类型(未稀释的或稀释标本);

5)应该考虑到标本的稀释液(如水、生理盐水、缓冲液)不会造成蛋白沉淀;

6)检测血红蛋白、胆红素和乳糜的波长。由于这些干扰物之间的光吸收波长有交叠，尤其要避免错误地估算血红蛋白和胆红素的结果，应该选择恰当的波长;

7)指数的级别数(干扰物的等级):每个干扰物的级别数是以方法性能为基础由制造商确定的。血红蛋白、胆红素和乳糜检测到的最大浓度以及设定的最高指数级别要依据干扰物的检测方法。不受HIL影响的方法不需要使用不同的HIL指数，而明显会受到HIL影响的方法需要不同级别的HIL指数来表示不同干扰物的不同浓度。HIL指数的设定应该小心仔细，警示患者结果受到HIL影响的阈值应该恰当，避免假性干扰结果的警示信息;

8)读数时间:HIL的检测不能够影响到系统的反应产量;

9)计算公式:血红蛋白、胆红素和乳糜的检测和浓度测量是在测量光谱范围内至少两种不同波长下(最好是在物质的最大吸收峰处)对吸收或反射光进行检测得到的，需要使用该纠正因子对血红蛋白、胆红素和乳糜在光谱范围内的交叠情况进行纠正。

HIL指数的设定过程可如下:

1)含有不同已知浓度的血红蛋白、胆红素和乳糜的系列标本(不稀释或使用水、生理盐水、缓冲液或试剂稀释);

2)使用血红蛋白、胆红素和乳糜恰当的波长对标本进行检测。可以使用两种或多种波长进行检测;

3)需要用到特殊的计算公式和纠正因子来分开血红蛋白、胆红素和乳糜的吸光度;

4)将纠正后的吸光度与血红蛋白、胆红素和乳糜已知的浓度进行比较;

5)每种干扰物以不同浓度和相应的纠正吸收值绘制校准曲线。对浓度(x轴)和纠正吸光度(y轴)进行线性回归，设定出HIL指数;

6)依据吸光度的读数来确定出HIL指数，其等级数量的确定要参考临床以及方法的检测性能;

7)制造商对设定的HIL指数的敏感性和特异性进行验证。评估的内容包括血红蛋白和脂质浓度指数I的敏感性，胆红素和脂质浓度指数H的敏感性，胆红素和血红蛋白浓度指数L的敏感性。

图5-4中给出了HIL干扰物的评估过程。

如果H的读数变化没有超过含有I和L的标本一个单位时，可以这样认为评估方法H不会受到I和L的影响。

类似的，要评价H和I对L的影响以及H和L对I的影响，使用标本含中等浓度水平的I和L。

由于血红蛋白、胆红素、乳糜的天然特性，结果应该以定性或浓度估算的方式表示。

表5-10中给出了当前自动化系统中使用到的HIL检测参数。

首先制备好干扰物不同浓度的血清池。推荐H使用新鲜红细胞溶解液、I使用未结合和结合胆红素，L使用高浓度的甘油三酯。双牛磺酸胆红素是一种商业合成的胆红素衍生物，其溶解性和光学特征与天然状态的结合胆红素类似，现已商业化用于I指数的建立，见图5-5。胆红素的两种形式不同的试剂系统对其反应可能有差异。由于获得高浓度的甘油三酯血清池是非常困难的，通常使用Intralipid ^(或等价物)来检测L指数。

使用正常、清洁的血清(如，血浆、脑脊液)来制备质控池(无干扰物)和检测池(有干扰物)。质控池中加入了与干扰物等量的生理盐水。检测池中加入了最大浓度的干扰物。从检测池和质控池中制备出不同浓度的干扰物标本。在特定波长下检测标本的吸光度。在化学分析仪上，使用不同的特定波长检测HIL指数。

分析仪制造商针对每种化学方法都要进行干扰物检测以评估任何可能的HIL干扰。如果检测到的干扰物在临床可接受标准前提下，制造商定义出“界值”，通常叫作警戒值(阈值)。

警戒值(阈值)指的是HIL检出干扰的最低浓度，在这种浓度下分析物浓度的检测结果会假性增加或降低。如果标本的HIL指数大于或等于警戒值(阈值)就给出一个干扰警示。在制造商的产品说明书中应该有HIL特定警戒值(阈值)下，在特定分析物水平上的干扰效果和干扰程度。

制造商和实验室在设定警戒值(阈值)时可以参考如下步骤:

1)在临床可接受标准前提下，观察到的偏倚的程度。

2)假性或必要的警示的出现频率。干扰物的浓度在HIL的浓度范围上限时造成的干扰出现频率。

由于HIL指数估算的是血红蛋白、胆红素和乳糜的浓度范围，制造商还要考虑到对“灰区”的定义，以提示实验室主任未知的干扰物存在情况下，检测到的干扰物最大浓度的潜在干扰。

对于每一种分析物，灰区代表着在有最大的检测干扰物浓度时的HIL指数小于或等于阈值。灰区处于可接受偏倚最大的浓度和不可接受偏倚最低浓度之间。

例如，胆红素对葡萄糖的干扰，胆红素的浓度从15mg/dl(阈值)起就会有干扰效果。I指数为5被认作为警戒值(阈值)，而I为4就被认作为灰区(图5-5)，见例2和例3。

灰区设立的作用可以提示HIL指数在超过最大干扰物浓度情况下，检测结果显示没有干扰存在。

例如，在血红蛋白浓度低于1000mg/dl时，血红蛋白对葡萄糖是没有观测到的干扰。H指数为8，血红蛋白浓度＞1000mg/dl，被认作为灰区，见例1。

1.下面的数据来自于血红蛋白对葡萄糖的剂量反应结果，见表5-11。

2.绘制干扰图，见图5-6。

3.此方法的分析偏倚为10%。高于10%或低于－10%的结果都被认作为干扰。所观测到的血红蛋白干扰物的百分偏倚是可接受的。

4.估算血红蛋白指数，见图5-7。

5.由于没有观测到干扰，所以没有设定出警戒值(阈值)。H为8被认作为灰区，是由于没有发现干扰。患者标本检测出H为8可以进行如下评论:血红蛋白浓度低于1000mg/dl，没有检测到干扰。

1.下面的数据来自于胆红素对葡萄糖的剂量反应结果，见表5-12。

2.绘制干扰图，见图5-8:

3.此方法的分析偏倚为10%。高于10%或低于－10%的结果都被认作为干扰。

4.估算胆红素指数，见图5-9。

5.百分偏倚大于10%，胆红素造成的干扰首先在浓度15mg/dl处出现。偏倚随着胆红素浓度水平的增加而提高。对于葡萄糖检测，I为4是灰区，I为5是警戒值(阈值)。

1.下面的数据来自于乳糜对葡萄糖的剂量反应结果，见表5-13。

2.绘制干扰图*，见图5-10。

3.此方法的分析偏倚为10%。高于10%或低于－10%的结果都被认作为干扰。

4.估算乳糜指数，见图5-11。

5.百分偏倚大于10%，乳糜造成的干扰首先在浓度600mg/dl处出现。偏倚随着乳糜浓度水平的增加而提高。对于葡萄糖检测，L为5是灰区，L为6是警戒值(阈值)。

大多数实验室使用中间设备或LIS来进行自动验证。可以使用规则或算法来警示实验室技术人员有差错，包括HIL警示。

HIL报告:

1)如果HIL指数低于方法的警戒值(阈值)，血红蛋白、胆红素和乳糜对结果没有干扰，报告检测结果。

2)如果HIL指数大于或等于警戒值(阈值)，结果报告中应该包括恰当的H、I或L的注释，以提示存在潜在的干扰。实验室应该对有干扰警示的标本和结果进行处理。

3)HIL指数应该在普通或高级的显示界面、输出界面以及LIS数据传输过程界面都有报告，见表5-14和表5-15。