四、可分解出致癌芳香胺染料的检测过程
虽然表3－2中列出了多项关于禁用AZO染料的检测方法标准，但这些方法中的关键测试技术内容几乎均相同，不同之处主要在于不同样品的预处理操作的差异。裂解过程发生的化学反应如下：
由于纺织品和皮革样品成分不同，分别将检测操作过程介绍如下。
（一）纺织品样品的测试
1. 纺织品中可分解出23种致癌芳香胺染料的检测
（1）预处理
取有代表性的样品，剪成约5 mm×5 mm的小片，混匀。从混合样品中称取1.0 g（精确至0.01g），置于可密封的硬质玻璃试管中（容积约60mL），加入16mL预热到（70 ± 2）℃的柠檬酸盐缓冲溶液（0.06mol/L，pH＝6）中，将玻璃试管密封后用力振摇，使所有样品浸入液体中，置于（70 ± 2）℃水浴中30min，保证所有织物被充分润湿。
（2）还原裂解
打开玻璃试管，加入3 mL新配制的连二亚硫酸钠溶液（200 mg/mL），立即密封振摇，然后将试管置于（70 ± 2）℃水浴中30min，取出后置于冰水浴中，快速冷却到室温。
若被测试样品为涤纶，则不按照上述操作进行裂解处理，按照标准GB/T 17593中另外给出的要求进行操作。
（3）固相萃取及浓缩
用玻璃棒挤压玻璃试管中的样品，将反应液全部倒入固相萃取柱（20 cm×2.5 cm、内装20g硅藻土）内，任其吸附15min，然后用80mL乙醚分4次（每次20mL）洗涤玻璃试管及样品，将乙醚洗涤液滗入固相萃取柱中，控制流速，收集及合并乙醚洗脱液于梨形烧瓶中。
将收集有乙醚样液的梨形烧瓶置于真空旋转蒸发器上，于35℃左右的低真空下浓缩至残液约1mL，再在氮吹仪中用氮气流将乙醚吹干，然后准确加入1mL甲醇（色谱级）到该梨形烧瓶中，混匀、静置，取适量样液，用0.45μm有机滤膜过滤后，进行仪器分析。
若采用GC－MS进行定量分析，可采用蒽－d10作为内标物，以提高定量准确性。
（4）仪器分析
针对样液中可能含有表3－1中芳香胺的分析，可采用的仪器有气相色谱质谱（GC－MS）、液相色谱（HPLC）、液相色谱－质谱、薄层色谱仪等设备，其中GC－MS和HPLC因价格适中、灵敏度高，在目前各检测实验室中应用最普及。由于色谱分析过程条件通常因操作人员、仪器型号及实验室条件的差异而变化，一般难以给出普适性的色谱分析条件。如下给出的色谱分析条件，已经证实在某些GC－MS和HPLC上可得到良好的分析结果。
GC－MS分析参数如下：
• 毛细管气相色谱柱：DB－5ms或HP－5ms（30m×0.25mm×0.25μm）；
• 进样口温度：250℃；
• 升温程序：50℃保持0.5min，20℃/min升温到150℃保持8min，20℃/min升温到230℃保持20min，20℃/min升温到260℃保持5min。
• 色谱质谱接口温度：270℃；
• 进样方式：不分流进样；
• 载气：氦气（纯度≥99.999%），流速1.0 mL/min；
• 进样体积：1.0μL；
• 电离方式：EI源/70 eV；
• 质量扫描范围：40~350（质荷比）
基于上述色谱条件，所得到的可致癌芳香胺的GC－MS色谱图如图3－1。
图3－1 可致癌芳香胺的GC－MS色谱图（21种）
注：图中序号与表3－1中对应，但未包含5、6和24。
HPLC的分析参数如下：
• 检测器：二极管阵列（DAD）
• 色谱柱：XDB－C18（5μm），250mm×4.6mm；
• 柱温：30℃；
• 进样体积：10.0μL；
• 检测波长：240 nm、280 nm、305 nm；
• 流动相流速：1.0 mL/min；
• 流动相A：甲醇；
• 流动相B：0.575 g磷酸二氢铵+0.7 g磷酸氢二钠+100 mL甲醇，用蒸馏水溶解、定容至1000 mL；
• 流动相梯度：见表3－3。
表3-3 流动相梯度
2. 纺织品中可分解出4－氨基偶氮苯染料的检测
（1）样品的制备及还原
取有代表性的样品，剪成5 mm×5 mm的小片，混匀。从混合样品中称取1.0 g（精确至0.01g），置于可密封的硬质玻璃试管中（容积约60mL），加入9mL氢氧化钠水溶液（20g/L），将玻璃试管密封后用力振摇，使所有样品浸入液体中，再加入1.0mL的连二亚硫酸钠水溶液（200mg/mL），立即密封振摇，置于（40 ± 2）℃水浴中30min，取出后置于冰水浴中，以快速冷却到室温。
（2）萃取
向上述反应器中加入10 mL的叔丁基甲醚，再加入7 g氯化钠，将玻璃试管密封，用力振摇，混匀后于机械振荡器中振摇45min，静置至两项分层，取上层清液，用0.45μm有机滤膜过滤后，进行HPLC或GC－MS分析。若采用GC－MS进行定量分析，可采用蒽－d10作为内标物，以提高定量准确性。
仪器分析参数可参照上述23种芳香胺的检测过程。所得到的GC－MS和HPLC图谱分别见图3－2和图3－3。
图3－2 4－氨基偶氮苯的GC－MS色谱图及质谱图
（a）色谱图（b）质谱图
（a）色谱图（b）光谱图
图3－3 4－氨基偶氮苯的HPLC色谱图及光谱图
（二）皮革样品的测试
1. 皮革中可分解出23种可致癌芳香胺染料的检测
（1）样品脱脂
取有代表性的样品，剪成约4 mm×4 mm的颗粒，混匀。从混合样品中称取1.0 g（精确至0.01g）置于可密封的硬质玻璃试管中（容积约60mL），加入20mL正己烷，密封后置于超声波浴中处理20min，滗出正己烷（勿损失样品），再用20mL正己烷按照同样方法处理一次。脱脂后的试样置于通风柜中，在敞口容器中放置过夜，使正己烷自然挥发干。
（2）还原裂解
向玻璃试管中加入17mL预热到（70 ± 2）℃的柠檬酸盐缓冲溶液（0.06mol/L，pH＝6），将玻璃试管密封后用力振摇，使所有样品润湿，然后置于（70 ± 2）℃水浴中30 min。
打开玻璃试管，加入1.5 mL新配制的连二亚硫酸钠水溶液（200 mg/mL），立即密封振摇，然后将试管置于（70 ± 2）℃水浴中10min，再加入1.5mL连二亚硫酸钠水溶液，继续加热10 min；玻璃试管取出后置于冰水混合浴中，快速冷却到室温。
（3）固相萃取及浓缩
用玻璃棒挤压玻璃试管中的样品，将反应液全部倒入固相萃取柱（20 cm×2.5 cm、内装20g硅藻土）内，任其吸附15min，然后向玻璃试管中加入5mL叔丁基甲醚和1mL氢氧化钠甲醇溶液（20%，质量分数），密封后充分振摇，将该溶液转移到固相萃取柱中。
分别用15、20及40 mL叔丁基甲醚洗涤玻璃试管，将洗涤后的样液依次转入到固相萃取柱中，收集及合并洗脱液于梨形烧瓶中。
将收集有叔丁基甲醚样液的梨形烧瓶置于真空旋转蒸发器上，于50℃左右的低真空下浓缩至残液约1mL，再在氮吹仪中用氮气流将叔丁基甲醚样液吹干。
（4）仪器分析
准确移取2 mL甲醇（色谱级），加入到浓缩近干的梨形烧瓶中，混匀、静置，取适量样液，用0.45μm有机滤膜过滤后，进行GC－MS或HPLC分析，具体仪器参数同上述纺织品测试过程。
2. 皮革中可分解出4－氨基偶氮苯染料的检测
（1）样品的脱脂及还原处理
取有代表性的样品，剪成约4 mm×4 mm的颗粒，混匀。从混合样品中称取1.0 g（精确至0.01g）置于可密封的硬质玻璃试管中（容积约60mL），加入20mL正己烷，密封后置于超声波浴中处理20min，滗出正己烷（勿损失样品），再用20mL正己烷按照同样方法处理一次。脱脂后的试样置于通风柜中，在敞口容器中放置过夜，使正己烷自然挥发干。
向玻璃试管中加入9mL的氢氧化钠水溶液（20g/L），将试管密封后用力振摇，使所有样品浸入液体中，再加入1.0 mL的连二亚硫酸钠水溶液（200 mg/mL），立即密封振摇，然后置于（40 ± 2）℃水浴中30min，取出试管后再置于冰水浴中，快速冷却到室温。
（2）萃取
向上述反应器中加入5 mL的叔丁基甲醚，再加入7 g氯化钠，将玻璃试管密封，用力振摇，混匀后于机械振荡器中振摇45min，采用静置或离心的方式使两相分层，取上层清液，用0.45μm有机滤膜过滤后，进行HPLC或GC－MS分析，具体仪器参数同上所述纺织品测试过程。