第10节 红细胞酶缺陷性贫血及其实验诊断
考纲要求
①红细胞酶代谢与功能；②红细胞酶缺陷的检验及其应用。
复习要点
一、红细胞酶代谢与功能
1.维持红细胞能量代谢的主要酶★★
（1）与糖代谢有关的酶 如丙酮酸激酶（PK）、2，3-二磷酸甘油酸（2，3-DPG）、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G-6-PD）等。
（2）谷胱甘肽还原酶系统 如谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、谷胱甘肽合成酶（GSH-Syn）、α-谷氨酰半胱氨酸合成酶（αGCs）、谷胱甘肽硫转移酶（GST）等。
（3）高铁血红蛋白还原酶系统。
2.红细胞酶缺陷★
红细胞酶缺陷多属遗传性，因其结构基因突变引起酶的活性减低、增加或正常，多表现为慢性非球形红细胞溶血性贫血，较为常见的是无氧酵解途径酶中PK的缺乏，戊糖旁路酶缺陷中最常见的是葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G-6-PD）缺乏。
二、红细胞酶缺陷的检验及其应用
1.高铁血红蛋白试验★★
（1）原理 在血液中加入亚硝酸盐使红细胞中的亚铁血红蛋白变成高铁血红蛋白，正常红细胞的G-6-PD催化戊糖旁路可使NADP+变成 NADPH，通过亚甲蓝试剂将其脱的氢传递给高铁血红蛋白（Fe3+），使其还原成亚铁血红蛋白（Fe2+），通过比色可观察还原的多少。
（2）参考值 正常人高铁血红蛋白还原率>75%（脐带血>77%）。
（3）临床意义 G-6-PD缺乏时，高铁血红蛋白还原率下降。中度缺乏（杂合子）为31%～74%，严重缺乏（半合子或纯合子）<30%。不稳定血红蛋白、血红蛋白H病、巨球蛋白血症、高脂血症等可产生假阳性结果，故本试验只能作为筛选试验。
2.变性珠蛋白小体检查★★
（1）原理 G-6-PD缺乏患者血样中加入乙酰苯肼于37℃孵育2～4h，用煌焦油蓝染色观察红细胞中珠蛋白小体的生成情况，计算含珠蛋白小体≥5个的红细胞的百分率。
（2）参考值 正常人含珠蛋白小体≥5个的红细胞一般<30%。
（3）临床意义 G-6-PD缺乏症时常高于45%，可作为G-6-PD缺乏的筛选试验；不稳定血红蛋白病含珠蛋白小体的细胞百分率为75%～84%，但还原型谷胱甘肽缺乏症也增高，血红蛋白H病（HbH病）和化学物质中毒时也增高。
3.红细胞葡萄糖-6-磷酸脱氢酶测定★★
（1）原理 在G-6-PD和NADP+存在下，G-6PD能使NADP+还原成 NADPH，后者在紫外线照射下发出荧光。 NADPH的吸收峰在波长340nm处，通过单位时间生成的NADPH的量来测定G-6-PD活性。
（2）参考值 正常人有很强荧光。正常人酶活性为（4.97±1.43）U/gHb。
（3）临床意义 G-6-PD缺陷者荧光很弱或无荧光；杂合子或某些G-6-PD变异者则可能有轻到中度荧光，G-6-PD缺乏者酶活性减少。
4.丙酮酸激酶测定★
（1）原理 在二磷酸腺苷（ADP）存在的条件下，丙酮酸激酶（PK）催化磷酸烯醇丙酮酸（PEP）转化成丙酮酸，在辅酶Ⅰ还原型（NADH）存在情况下，丙酮酸被LDH转化为乳酸，若标记荧光于NADH上，此时有荧光的NADH变为无荧光的NAD。
（2）参考值 正常荧光在20min内消失。
（3）临床意义 PK严重缺乏者荧光60min不消失；PK中度缺乏者荧光25～60min消失。纯合子PK值在正常活性到25%以下，杂合子为正常25%～50%。
三、红细胞酶缺陷性贫血的实验诊断
1.红细胞G-6-PD缺乏症★★★
（1）定义 红细胞G-6-PD缺乏症是一种红细胞G-6-PD活性降低和（或）酶性质改变，从而引起以溶血为主要临床表现的遗传性疾病。本病分为5型，即蚕豆病、药物致溶血性贫血、感染诱发溶血、新生儿高胆红素血症和遗传性非球形红细胞溶血性贫血。
（2）筛检试验
①高铁血红蛋白还原试验 阳性，杂合子G-6-PD中等缺乏者高铁血红蛋白还原率为31%～74%，脐血为41%～77%；纯合子或半合子G-6-PD严重缺乏者高铁血红蛋白还原率>30%，脐血<40%。
②G-6-PD荧光斑点法 G-6-PD活性中等缺乏者10～30min出现荧光；严重缺乏者30min不出现荧光。
（3）确诊试验 G-6-PD活性测定。
2.红细胞丙酮酸激酶缺陷症（PKD）★★★
（1）定义 PKD是PK基因缺陷导致RBC内无氧糖酵解途径中常见的关键酶，即PK酶活性减低或性质改变所致的溶血性贫血，本病属常染色体隐性遗传病。
（2）筛检试验 PK荧光斑点法，PK酶中等缺乏者（杂合子型）20～60min荧光消失，严重缺乏者（纯合子型）60min荧光不消失。
（3）确诊试验 PK活性检测，PK酶中等缺乏者（杂合子型）为正常活性的25%～50%，严重缺乏者（纯合子型）为正常的活性25%以下。
考题回顾与同步练习
【例1】具有保护Hb的巯基及红细胞膜作用的红细胞酶是
A.G-6-PG B.丙酮酸激酶 C.乳酸脱氢酶 D.谷胱甘肽还原酶 E.高铁血红蛋白还原酶
【例2】蚕豆病可见
A.正细胞正色素性贫血 B.巨幼细胞贫血 C.小细胞正色素性贫血 D.小细胞低色素性贫血 E.红细胞酶缺陷性贫血
参考答案
1.D 2.E