第一部分　基础性实验

实验一　接种工具的认识与使用

1.认识接种工具，学会使用方法，学习包扎接种针、移液管及灭菌方法。

2.学习接种的基本技能。

接种是发酵技术的最基本操作，微生物的传代和扩大培养都需要接种或移种。接种是指将微生物接到适合其生长的营养物上使微生物繁殖的操作。移种是指将已培养好的培养物转接到新鲜的培养基中，使其进一步扩大培养和生长繁殖的操作。接种工具常用的有接种针、接种环、接种铲、移液管等。

不同的菌，采用不同的接种方法。一般细菌和酵母菌由于菌落比较湿润，容易黏附到接种工具上，因此可以用接种针或接种环接种；而放线菌和霉菌的菌落比较干燥，不容易黏附在接种工具上，因此用接种铲铲起斜面表层的一块菌苔作为接种物。接种过程是一个无菌过程，接种工具、接种环境以及培养基都应该保证无菌。

接种针、接种环、移液管、棉花、牛皮纸、试管斜面培养基、液体培养基。

1.认识接种针、接种环（图1-1）

图1-1　接种针、接种环

2.两斜面之间的接种方法

（1）贴标签：接种前在试管上贴上标签，注明菌名、接种日期、接种人姓名等。贴在距试管口2～3cm的位置（若用记号笔标记则不需标签）。

（2）点燃酒精灯。

（3）接种：用接种环将少许菌种移接到贴好标签的试管斜面上（图1-2）。操作必须按无菌操作法进行。简述如下：

图1-2　两斜面之间的接种

① 手持试管　将菌种和待接斜面的两支试管用大拇指和其他四指握在左手中，使中指位于两试管之间部位。斜面面向操作者，并使它们处于水平位置。

② 旋松管塞　先用右手松动棉塞或塑料管盖，以便接种时拔出。

③ 取接种环　右手拿接种环（如握钢笔一样），在火焰上将环端灼烧灭菌。然后将有可能伸入试管的其余部分均灼烧灭菌。重复此操作，再灼烧一次。

④ 拔管塞　用右手的无名指、小指和手掌边先后取下菌种管和待接试管的管塞，然后让试管口缓缓过火灭菌（切勿烧得过烫）。

⑤ 接种环冷却　将灼烧过的接种环伸入菌种管，先使环接触没有长菌的培养基部分，使其冷却。

⑥ 取菌　待接种环冷却后，轻轻蘸取少量菌体或孢子，然后将接种环移出菌种管。注意不要使接种环的部分碰到管壁，取出后不可使带菌接种环通过火焰。

⑦ 接种　在火焰旁迅速将沾有菌种的接种环伸入另一支待接斜面试管。从斜面培养基的底部向上部作“Z”形来回密集划线，切勿划破培养基。有时也可用接种针仅在斜面培养基的中央画一条直线作斜面接种，直线接种可观察不同菌种的生长特点。

3.种子培养物转接发酵摇瓶

① 用右手的无名指、小指和手掌夹住种子瓶的棉塞，轻轻拔出，将瓶口过火后移开，但使瓶口仍靠近并面向火焰。

② 将移液管伸入种子摇瓶培养物中吸出要求量的培养物，食指按住移液管顶部，小心取出移液管。

③ 用右手的无名指、小指和手掌夹住发酵摇瓶的纱布塞，轻轻拔出，将摇瓶过火后移开，但使瓶口仍靠近并面向火焰。

④ 将带有菌体的移液管伸入待接种的摇瓶，放松移液管顶部，接入种子液，取出移液管，放入消毒水中。

⑤ 摇瓶口包上纱布，放恒温摇床培养。

灭菌后如果比较湿对接种有没有影响，怎么办？