实验二　淀粉酶生产菌的筛选

学习淀粉酶产生菌的筛选方法。

淀粉酶在酿造、纺织、食品加工、医药等领域有广泛用途。淀粉酶是一类淀粉水解酶的统称，它能将淀粉水解成糊精等小分子物质并进一步水解成麦芽糖或葡萄糖。淀粉被水解后，遇碘不再变蓝色，因此可根据淀粉培养基上透明圈的大小来判断所选菌株的淀粉酶活力。

1.样品

淀粉含量丰富的土样。

2.培养基

肉汤培养基：牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl 5g，加水至1000mL，pH7.0。121℃灭菌20min。

初筛平板培养基：牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl 5g，可溶性淀粉2g，琼脂18g，加水至1000mL，pH7.4。121℃灭菌20min。

Lugol碘液：碘1g，碘化钾2g，蒸馏水300mL。先将碘化钾溶解在少量水中，再将碘溶解于碘化钾溶液中，待碘全溶后，加足水即可。

3.器材

高压蒸汽灭菌锅，超净工作台，电子天平，电炉，恒温振荡器，恒温培养箱；烧杯，量筒，三角瓶，培养皿，移液管，洗耳球，试管，试管架，接种针，涂布棒。

1.培养基制备

配制肉汤培养基45mL，分装于250mL三角瓶中，纱布封口，灭菌。配制初筛平板培养基350mL，分装于500mL三角瓶中，封口膜封口，灭菌。

2.倒平板

将融化的初筛平板培养基冷却至50～60℃，以无菌操作法倒至已灭菌的培养皿中，至盖满底部。冷却凝固待用。

3.样品预处理

取5g土样接入45mL肉汤培养基中，30℃摇床振荡15min制成土壤悬液，此时的稀释度为10-1。另取4支试管，分别记作10-2、10-3、10-4、10-5，共5个梯度，每支试管内加入9mL无菌水。用无菌移液管从三角瓶中吸取1mL土壤悬液，加入到10-2试管中混匀，再从此试管中吸取1mL加入到10-3试管中，依此类推直至10-5试管。

4.平板涂布分离

分别从不同稀释度的试管中吸取0.1mL悬液，均匀涂布于初筛平板培养基平板上，于30℃培养24～48h。

5.菌株检测

待初筛平板长出菌落后，根据菌落不同挑取菌落进行保存并编号。同时，将检测试剂（Lugol碘液）加入到平板中，涂布均匀，菌落周围形成水解圈的菌株即是产淀粉酶的菌株，记住其编号，以便进行下一步实验。

6.保存菌种

将得到的菌株转接至斜面培养基上，30℃培养48～72h，待菌苔长好后，4℃保存。

微生物菌种的分离筛选通常包括哪几个部分？