实验三　蛋白酶产生菌发酵菌株的初筛

1.从已分离到的细菌或真菌中筛选出能产生生理活性物质的菌株。

2.学习蛋白酶产生菌的筛选方法。

1.复习微生物学及实验过程所学到的微生物培养的方法，了解影响微生物生长的各种条件因素。

2.独立查阅相关资料，设计实验方案，并对实验所需的各种药品、玻璃仪器及分析设备列出清单，写出详尽的实验过程及需要。

3.三人一组，互相配合，开展实验，动手完成实验，记录并分析实验中的实验现象、数据，必要时及时修改实验计划。

4.总结实验数据，经教师认定后，撰写实验报告。

蛋白酶是一类重要的工业用酶制剂，它能将蛋白质分解成短肽甚至氨基酸。根据三氯乙酸能将酪蛋白变性从而产生沉淀这一原理，可在平板培养基上直接筛选蛋白酶产生菌株。产酶菌株能将酪蛋白水解成小分子物质，菌落周围不形成沉淀蛋白而出现透明圈，根据透明圈大小判断产酶活力。

本实验以蛋白酶产生菌株的筛选为例，介绍发酵菌种的初步筛选方法。

1.菌株

自然界中分离到的目的菌株。

2.蛋白酶产生菌筛选培养基

葡萄糖0.05%，氯化钠0.5%，磷酸氢二钾0.05%，磷酸二氢钾0.05%，酪蛋白1%，琼脂2%，pH7.5。

3.器材

培养皿、吸管、250mL三角瓶、无菌水（含灭菌玻璃珠）、标签纸、三氯乙酸、碘液、玻璃刮铲、吸管、电炉、天平等。

① 配制蛋白酶产生菌的筛选培养基，装于三角瓶中，121℃灭菌30min，冷却至60℃时倒平板，每皿约20mL。

② 配制指示菌菌悬液，以无菌操作法挑取3环细菌或酵母指示菌菌苔装到有3mL无菌水的试管中，制成菌悬液，吸取0.1mL涂布在相应培养基的平板上。

③ 将平板放在培养箱中培养1～2天，观察菌落的生长情况。

④ 蛋白酶产生菌培养基上形成菌落后，可在平板上滴加2.5%三氯乙酸溶液，以刚铺满平皿为度，菌落周围如有无色透明圈出现，说明该菌产蛋白酶。

查阅资料，设计一个实验来筛选脂肪酶或其他酶的产生菌。