工作任务
任务1 MS培养基母液的配制与保存
一、工作目标
通过此项工作掌握植物组织培养中母液配制与保存的基本知识，并掌握MS培养基母液的配制与保存技术。
MS大量元素母液配制
二、材料用具
配制MS培养基母液所需各种药品、蒸馏水、电子天平、烧杯、量筒、定容瓶、母液瓶、标签、冰箱、滤纸等。
三、工作过程
1．母液的配制
铁盐母液配制
参见表2-4。
（1）母液1的配制 先按照扩大的倍数计算称取量，用天平称取母液1的各种药品，用蒸馏水将药品分别溶解，然后依次混合，定容为1L，成为10倍液。
（2）母液2的配制 先按照扩大的倍数计算称取量，用天平称取母液2的各种药品，用蒸馏水将药品分别溶解，然后依次混合，定容为500mL，成为100倍液。
（3）母液3的配制 先按照扩大的倍数计算称取量，用天平称取母液3的各种药品，用蒸馏水将药品分别溶解，然后依次混合，定容为500mL，成为100倍液。
（4）母液4的配制 先按照扩大的倍数计算称取量，用天平称取母液4的各种药品，用蒸馏水将药品分别溶解，然后依次混合，定容为1L，成为100倍液。
（5）母液5的配制 先按照扩大的倍数计算称取量，用天平称取母液5的各种药品，用蒸馏水将药品分别溶解，然后依次混合，定容为1L，成为100倍液。
（6）母液6的配制 先按照扩大的倍数计算称取量，用天平称取母液6的各种药品，用蒸馏水将药品分别溶解，然后依次混合，定容为100mL，成为100倍液。
2．母液的保存
（1）装瓶 将配制好的母液分别倒入瓶中，瓶上贴好标签，注明培养基名称、母液号、扩大倍数与配制日期。
（2）贮藏 将母液瓶储放在5℃左右的冰箱中保存。
四、注意事项
（1）各种药品一定要充分溶解后才能混合。
（2）一定将配好的母液做好标记，以免弄混。
五、考核内容与评分标准
1．相关知识
培养基由哪些成分组成，如何配制和保存（30分）?
2．操作技能
（1）掌握培养基母液的操作流程（40分）。
（2）掌握母液保存技能（30分）。
任务2 常用激素母液的配制与保存
一、工作目标
通过此项工作掌握植物组织培养中激素母液配制与保存的基本知识，并掌握常用激素基母液的配制与保存技术。
二、材料用具
NAA、2，4-D、6-BA、IBA、蒸馏水、电子天平、烧杯、量筒、定容瓶、母液瓶、标签、冰箱、1mol/L NaOH、1mol/L HCl、95%乙醇、滤纸等。
三、工作过程
一般来说，配制生长素类物质（如IAA、2，4-D、NAA等）时，将其先溶于少量95%酒精溶液中或1mol/L NaOH中，待其充分溶解后，加水定容到所要求的浓度。而细胞分裂素类物质（如KT、6-BA等）要先溶于少量1mol/L HCl中，待其充分溶解后，再加水定容到所要求的浓度。现以配制100mL、0.1mg/mL的NAA为例说明激素母液配制具体过程。
（1）称量 用电子天平准确称量NAA 10mg。
（2）溶解 将NAA溶于少量95%乙醇中或1mol/L NaOH中。
（3）定容 将NAA溶液倒入100mL定容瓶中，并加蒸馏水至水位线。
（4）保存 将100mL NAA溶液倒入母液瓶中，并贴好标签，注明母液名称、配制浓度、配制日期等，置于冰箱中保存。
四、注意事项
（1）溶解药品时所用的1mol/L NaOH、1mol/L HCl、95%乙醇不能加入过多。
（2）一定将配好的母液做好标记，以免弄混。
五、考核内容与评分标准
1．相关知识
各激素母液分别需要用什么物质溶解，如何配制和保存（30分）?
2．操作技能
（1）掌握配制激素母液的操作流程（40分）。
（2）掌握母液保存技能（30分）。
任务3 MS固体培养基的配制与灭菌
一、工作目标
通过此项工作掌握植物组织培养中固体培养基的配制与灭菌的基本知识，并掌握MS固体培养基的配制与灭菌技术。
二、材料用具
配制MS培养基所需的各种母液、生长调节物质母液、琼脂、蔗糖、蒸馏水、移液管、量筒、定容瓶、电炉、酸度计或pH试纸、0.1mol/L NaOH、0.1mol/L HCl、培养瓶、标签、铅笔等。
三、工作过程
（一）培养基配制方法
MS固体培养基的配制
（1）按母液顺序和规定量，用吸管提取母液，放入盛有一定量蒸馏水的量筒。
（2）加入生长调节物质：视配制的培养基而定。
（3）加入蔗糖：30g/L。
（4）加蒸馏水定容后倒入锅中。
（5）调节pH值：用0.1mol/L的NaOH或0.1mol/L的HCl调节pH值。
（6）熔化琼脂：6.5g/L（视琼脂质量而定）在电炉上加热溶液，并不断搅拌，使琼脂溶化。
（7）培养基的分装与封口：将培养基装入培养瓶中并封口。
（二）灭菌方法
1．高压蒸汽灭菌
（1）洗涤 把培养皿、三角瓶等器皿彻底清洗干净。
（2）包扎 用报纸把培养皿、剪刀、镊子等包好。
（3）灭菌 打开锅盖，加水至水位线。把已装好培养基的三角瓶，连同蒸馏水及接种用具等放入锅筒内，装时不要过分倾斜培养基，以免弄到瓶口上或流出。然后盖上锅盖，对角旋紧螺丝，接通电源加热，当升至0.05MPa时，打开放气阀放气，指针回到“0”后关闭放气阀。当气压上升到0.10MPa时，保压灭菌20min，到时停止加热。当气压回到“0”后打开锅盖，取出培养基和灭菌用品，放于平台上冷凝。
（4）贮藏 灭好菌的培养基放置于温度低于30℃，没有强光照射的地方，但不要放置时间太长，最多不能超过1周。
2．干热灭菌
（1）洗涤 把培养皿、三角瓶等器皿彻底清洗干净。
（2）灭菌 150℃，1h。
四、注意事项
（1）配制前要做好配制计划。
（2）在使用高压锅灭菌时要严格按照规范操作。
五、考核内容与评分标准
1．相关知识
培养基由哪些成分组成，如何进行配制（30分）?
2．操作技能
（1）掌握配制液体培养基的操作流程（20分）。
（2）掌握配制固体培养基的操作流程（30分）。
（3）掌握培养基灭菌技能（20分）。
任务4 培养基配方的设计
一、工作目标
通过此项工作掌握植物组织培养中培养基的主要成分及配方的基本知识，并掌握培养基配方的设计技术。
二、具体要求
设计一个需要配制1L的固体培养基的配方，配方中要求包括培养基的基本成分。
三、基本操作
1．基本培养基的选择
由于MS培养基成分完全，适于许多植物的培养，因此选择培养基时，首先用MS培养基试用，合适就定为基本培养基，不合适再选择其他培养基配方，如B5、N6、White等。如果有合适的就选用，如何不合适就进行基本培养基各组分的正交试验，直到选择出合适的基本培养基。
2．植物激素配比的选择
通常是细胞分裂素和生长素各浓度之间的配比组合。各激素的选择和浓度的配比要适合该培养基的用途。
3．糖浓度的选择
糖浓度的选择一般比较简单，通常情况下选用2%或3%，但有时也根据植物或培养目的的不同有所调整。
4．琼脂浓度的选择
琼脂的用量在6～10g/L之间，若浓度太高，培养基就会变得很硬，营养物质难以扩散到培养的组织中去。若浓度过低，凝固性不好。有时琼脂的浓度要根据琼脂的质量来确定。
5．其他物质的选择
有时要根据培养基用途的不同考虑加入其他物质，如有机附加物、活性炭、抗坏血酸等。选择时要根据各物质的用途确定是否加入和加入的量。
四、考核内容与评分标准
1．相关知识
培养基由哪些成分组成（20分）?
2．操作技能
（1）掌握培养基的设计流程（40分）。
（2）掌握激素的设计流程（40分）。
素质拓展