第二节　胎牛血清

胎牛血清（fetal bovine serum，FBS）是由胎牛血凝集而成的液体组分，不含细胞、纤维蛋白和凝血因子，但含有大量细胞生长所必需的营养因子和大分子因子。牛血清白蛋白是牛血清蛋白的主要成分。胎牛血清中的生长因子对培养细胞的维持和生长是必不可少的。FBS还含有各种小分子，如氨基酸、糖、脂和激素。

胎牛血清的主要用途之一是真核细胞培养，其浓度高达20%甚至更高，可提供许多促进细胞存活和增殖的必需营养和生长因子。然而，要注意到，人类细胞培养中的胎牛血清可能会引入研究人工制品；用人血清培养的人细胞与用胎牛血清培养的人细胞的行为不同。FBS还用于人类和兽用疫苗以及生物技术药物的研究、制造和控制，并用于阻止胰蛋白酶消化或作为低温保存的保护剂。

一、特级类胎牛血清

1.Hyclone北美特级胎牛血清

经过40nm过滤，内毒素含量小于10EU/mL，血红蛋白含量小于10mg/dL，有较好的促细胞生长作用及产品稳定性。此血清可广泛用于细胞培养，包含干细胞系的培养。

2.Gibco北美特级胎牛血清

经过100nm过滤3次，内毒素和血红蛋白含量都可与Hyclone北美特级胎牛血清相媲美，可以用于培养大部分的干细胞系。

3.Corning Cellgro澳洲特级胎牛血清

经过100nm过滤3次，内毒素低达0.14EU/mL，超低血红蛋白，已在4种细胞进行生长实验，性价比高。

二、优等类胎牛血清

1.Hyclone加拿大优等胎牛血清

经过3次100nm过滤，内毒素含量小于25EU/mL，血红蛋白含量小于25mg/dL。此血清在2005年以前是很多实验室的首选，价格适中，质量过硬，应用细胞非常广泛。

2.Gibco澳大利亚胎牛血清

与Hyclone南美胎牛血清差不多，可用于干细胞培养。

三、普通进口胎牛血清

Hyclone南美胎牛血清，采自南美，在国内（兰州）过滤并测试检验，经3次100nm过滤，内毒素含量≤10EU/mL，血红蛋白含量≤20mg/dL。此血清广泛用于各种肿瘤细胞的培养，还没有资料记载能够用于干细胞。

四、血清使用需要注意的问题

（一）被误判为污染的“小黑点”

经过热处理的血清，往往沉淀物会增多，而这些沉淀物在倒置显微镜下观察像是污染物，常常会让研究者误以为血清遭到污染。然而，把血清放在37℃环境中，又会使此沉淀物进一步增多，使研究者误认为是微生物的分裂扩增。

（二）解冻血清

解冻血清时，请遵循推荐的分步解冻方法（-20℃→4℃→室温）。实验表明，如果血清解冻温度过高（如-20℃→37℃），很容易产生沉淀。解冻血清时，请随时摇匀，使温度和成分均匀，减少沉淀的发生。请不要长时间将血清放置在37℃环境中，如果放置时间过长，血清会变得混浊，血清中的许多不稳定成分会受到破坏，从而影响血清的质量。血清的热灭活很容易引起沉淀物的增加，这一步是不必要的。如需对血清进行热灭活，请遵循56℃、30min原则，随时摇匀。如果温度过高、时间过长或摇晃不均匀，沉淀物就会增加。

血清中出现沉淀物的原因有很多，但最常见的是血清中脂蛋白的变性，解冻后血清中还会存在纤维蛋白（形成凝块的蛋白质之一），这也是产生沉淀物的主要原因之一。然而，这些絮状沉淀物虽然并不影响血清本身的质量，但有可能会被误判为污染物。如果要去除这些絮状沉淀物，可以将血清分装在无菌离心管中，以1 200rpm的速度离心，然后将上清液加入培养基中进行过滤。不建议通过过滤去除这些絮状沉淀物，可能会堵塞滤膜。

（三）保存血清

避免血清出现非污染性沉淀物的最好方法就是减少血清反复冻融的次数，所以血清少量分装冻存是一个好方法。建议血清保存在-20～-5℃之间。如果以4℃保存，不要超过一个月。如果一次不能用完一瓶，建议将血清分装到无菌离心管中，然后再冻存。