实验七　淀粉酶的提取

掌握盐析法的基本原理，学会用盐析法提取蛋白质。

盐析法是加入中性盐到蛋白质溶液中，蛋白质的溶解度开始增大，但随着继续加入盐，蛋白质的溶解度却逐步减小，并形成沉淀，不同蛋白质在不同中性盐浓度下析出，利用此原理，可对溶液中的杂蛋白质及目的蛋白质进行分级沉淀以达到提取分离的目的。

1.粗酶液

实验二保存的菌种进行摇瓶发酵，发酵液离心后可作为粗酶液。

2.器材

烧杯，布氏漏斗，真空泵。

1.盐析

取120mL发酵液倒入烧杯中，调pH至6.7～7.8，加硫酸铵使其浓度达到40%～42%，加完后静置数小时（3h以上），即可抽滤或离心，收集滤饼。

2.加入硫酸铵量的计算方法

硫酸铵的溶解度在0～30℃变化很少，在水中饱和溶液浓度约为1.235g/mL。在20℃饱和溶液为533g/L，但加入硫酸铵体积会变大，1L水中加硫酸铵至饱和需加硫酸铵761g。

考虑到溶液硫酸铵体积要增大，则于20℃时使1L M1物质的量浓度硫酸铵溶液增至M2物质的量浓度，所需的硫酸铵量为G。

G=533（M2-M1）/（4.05-0.3M2）

上式如以饱和度表示，则以S1%增至S2%，需加入量为

G=533（S2-S1）/（100-0.3S2）

本实验所需硫酸铵浓度为40%～42%。

当硫酸铵浓度为40%时，

G=533（40-0）/（100-0.3×40）=242.3g/L

本实验所需发酵液为120mL，

即G=242.3×0.12=29g

同理，当硫酸铵浓度为42%时，

G=533（42-0）/（100-0.3×42）=256.1g/L

本实验所需发酵液为120mL，

即G=256.1×0.12=30.7g

本实验所需硫酸铵为29～30.7g，统一定为加入30g。

淀粉酶提取纯化还可以用什么方法？