实验八　灰色链霉菌的活化

学习制备高氏一号斜面培养基的方法以及斜面接种技术。

高氏一号斜面培养基是一种合成培养基，用于培养放线菌。

1.菌种

灰色链霉菌。

2.培养基

可溶性淀粉20g，硝酸钾1g，氯化钠0.5g，磷酸氢二钾0.5g，硫酸镁0.5g，硫酸亚铁0.01g，琼脂20g，水1000mL，pH7.2～7.4（配制时注意，可溶性淀粉要先用冷水调匀后再加入到培养基中）。

3.器材

天平、500mL刻度量杯、小刀、牛角匙、玻棒、纱布、18mm×180mm试管、棉花、电炉、烧杯、记号笔、酒精灯、接种环等。

1.高氏一号培养基的制备

（1）按配方称量药品，加热搅拌至琼脂完全熔化，补水至1000mL。趁热分装于18mm×180mm试管，斜面以8mm为宜。

（2）分装完毕后，塞好棉塞并将试管捆扎好。高压蒸汽灭菌，121℃灭菌20min，灭菌后趁热摆斜面。

2.斜面接种

接种是将纯种微生物，在无菌操作条件下，移植到已灭菌并适宜该菌生长繁殖所需要的培养基中。为了获得微生物的纯种培养，要求接种过程中必须严格进行无菌操作。一般是在无菌室内、超净工作台或实验台酒精灯火焰旁进行。

（1）左手拿试管菌种，右手拿接种环，先将金属环烧灼灭菌，再将接种环在空白培养基处冷却，挑取菌落，在火焰旁稍等片刻。

（2）左手将试管菌种放下，拿起斜面培养基，在火焰旁用右手小指和手掌边缘拔下棉塞并夹紧，迅速将接种环伸入空白斜面，在斜面培养基上轻轻划线，将菌体接种于其上。划线时由底部向上划一直线，一直划到斜面的顶部。注意勿将培养基划破，不要使菌体沾污管壁。

（3）灼烧试管口，在火焰旁将棉塞塞上。接种完毕，接种环上的余菌必须灼烧灭菌后才能放下。

（4）斜面置于28℃恒温箱中，培养5～6天观察结果。